(7分)现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质,利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性,并比较二者毒性的强弱。请完成下列实验报告:
Ⅰ.实验材料:小白鼠胚胎。
Ⅱ.药品用具:胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。
Ⅲ.实验原理: 。
根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值),可判断该化学物质的毒性。
Ⅳ.实验步骤:
(1)制备细胞悬浮液:
把小白鼠胚胎进行处理离散成单个细胞后,加入动物细胞培养液,制成细胞悬浮液。
(2)进行细胞培养:
①取A、B、C三个洁净的培养瓶,分别加入等量的细胞悬浮液。
② 。
③C瓶不作处理,作为对照。
把三个培养瓶放在37℃(或适宜温度)的细胞培养箱中培养
(3)制作临时装片:
①当细胞繁殖到大约第8代左右时,同时取出三个培养瓶,用胰蛋白酶液处理,使细胞从瓶壁上脱落,加入动物细胞固定液杀死细胞并固定其分裂相。
②静置一段时间后,分别从各培养瓶底部吸取适量的悬浮液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央,加1~2滴适宜浓度的 染色,3~5min后,盖上盖玻片,制成临时装片。
(4)镜检和统计:把临时装片放在显微镜下,按照 的顺序观察,寻找处于有丝分裂 期的细胞,观察其染色体,并与小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片对比以确认发生上述变异的细胞,同时统计该期变异的细胞占该细胞总数的百分数(Q值)。
V.实验结果:
培养瓶 |
A |
B |
C |
Q值 |
1.3% |
12.5% |
0.1% |
VI.实验结论: 。